從新冠病毒回顧光學(xué)顯微鏡發(fā)展歷程：這個(gè)難題百年后才有突破
突然襲來的新冠肺炎疫情，讓人類又一次見識了病毒的威力。肉眼看不到的病毒作為一類物種，很可能從地球生命誕生之初就已經(jīng)存在，而人類從意識到有病毒存在，再到看到病毒的模樣，直至最后弄清病毒的內(nèi)部結(jié)構(gòu)成分，經(jīng)歷了漫長的過程。
病毒在19世紀(jì)末就已被證實(shí)肯定存在，但因“阿貝極限”使光學(xué)顯微鏡無法達(dá)到更高的分辨率，始終看不到病毒的蹤影，直至近年來這個(gè)難題被科學(xué)家解決。
撰文 | 小 溪
20世紀(jì)30年代，電子顯微鏡的發(fā)明使神秘的病毒終于現(xiàn)出了真身，只是電子顯微鏡的原理決定了它無法用于活細(xì)胞的觀察及獲取生物活動(dòng)的動(dòng)態(tài)信息，而攻克致病病毒，需要深入了解病毒在活細(xì)胞內(nèi)感染、復(fù)制及釋放的動(dòng)態(tài)過程。
科學(xué)界期待著能有可獲取生物過程動(dòng)態(tài)信息的、更高分辨率的光學(xué)顯微鏡。光學(xué)顯微鏡的“阿貝極限”究竟有沒有可能被突破呢？
盡管每項(xiàng)科學(xué)技術(shù)的發(fā)展都會(huì)歷盡艱辛，只是沒想到，真正突破“阿貝極限”竟用了百余年，在此期間數(shù)項(xiàng)新技術(shù)的發(fā)明起到了極為關(guān)鍵的作用！
“相襯”是顯微技術(shù)中的一個(gè)重大進(jìn)步。
光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞時(shí)一般都需要染色，這是因?yàn)榧?xì)胞結(jié)構(gòu)中大部分組分都是透明的。透明度高的物體也稱為位相物體，光波通過位相物體時(shí)不改變振幅 (光的強(qiáng)弱) 只改變位相，但人眼只能辨別出振幅的變化，因此在光學(xué)顯微鏡下難以區(qū)分不同的細(xì)胞組分。
用有機(jī)染料對不同的細(xì)胞組分進(jìn)行選擇性染色后，可借助不同的顏色反襯來提高細(xì)胞不同組分圖像的對比度，便于更清楚地進(jìn)行觀察和研究。但染色是一個(gè)非常困難和耗時(shí)的過程，常常會(huì)對觀察的生物樣本產(chǎn)生傷害，甚至殺死細(xì)胞。
波的位相示意圖
有沒有辦法讓光學(xué)顯微鏡的生物樣本可以不經(jīng)染色而直接清楚地觀察到活細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)呢？
20世紀(jì)30年代初，荷蘭的弗里茨·澤尼克 (Frits Zernike) 在實(shí)驗(yàn)中偶然發(fā)現(xiàn)：不可見的光相位變化可以轉(zhuǎn)變?yōu)榭梢姷恼穹兓?，他根?jù)位相理論研究出了位相反襯法 (一種光學(xué)信息處理方法) ，通過某種空間濾波器將位相變化產(chǎn)生的不可見信息轉(zhuǎn)化為與之等價(jià)的可見的振幅信息，改善透明物體成像的反襯度，可大大提高透明物體的可分辨性。
弗里茨·澤尼克(Frits Zernike)
澤尼克利用光的干涉原理，在傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡中加入相位板 (將位相差轉(zhuǎn)換成振幅差) 研制出相襯顯微鏡 (Phase Contrast Microscope，簡稱PCM) 的原型機(jī)并申請了專利，可惜當(dāng)時(shí)他的發(fā)明沒有受到重視。
第二次世界大戰(zhàn)的爆發(fā)影響了澤尼克的研究，但他以百折不撓的精神不斷改進(jìn)技術(shù)。1941年，第一臺(tái)實(shí)用的相襯顯微鏡終于在蔡司公司誕生。當(dāng)時(shí)的顯微鏡觀察細(xì)胞時(shí)都需要染色 (染色會(huì)殺死細(xì)胞) ，而相襯顯微鏡則可直接觀察到活細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。
目前，大部分高級光學(xué)顯微鏡及電子顯微鏡中都配置了相襯部件。相襯顯微鏡在細(xì)菌學(xué)、病理學(xué)等方面應(yīng)用廣泛，生物學(xué)研究因此有了極大突破(澤尼克因論證相襯法及發(fā)明相襯顯微鏡的貢獻(xiàn)獲1953年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng))。
早期的相襯顯微鏡
下排是透明樣品加上相襯技術(shù)后的顯微圖像
熒光的發(fā)現(xiàn)為后來超分辨率光學(xué)顯微鏡的研制打下了基礎(chǔ)。
早在1845年，英國皇家學(xué)會(huì)的約翰·赫歇爾 (John Herschel) 在一份報(bào)告中描述了他觀察到的一種現(xiàn)象：加了硫酸奎寧 (一種藥物) 的蘇打水在太陽光照射下會(huì)發(fā)出天藍(lán)色的光。以后，雖然也有人發(fā)現(xiàn)類似的現(xiàn)象，但一直沒人能給出科學(xué)的解釋。
約翰·赫歇爾(John Herschel)
1852年，英國的喬治·斯托克斯 (George Stokes) 在他的巨著《論光的折射率變化 (On the Change of Refrangibility of Light) 》中指出：用分光計(jì)觀察太陽光照射奎寧和葉綠素的水溶液時(shí)，只有當(dāng)溶液置于光譜的紫外光區(qū)域才會(huì)產(chǎn)生所發(fā)光的波長比入射光波長要長效果。
斯托克斯判定：這種現(xiàn)象是由于這些物質(zhì)吸收光能后重新發(fā)射出不同波長的光 (屬光致發(fā)光)，并非因光的漫射作用引起，他把這種光稱為熒光 (Fluorescence)。
1864年他在一次演講中首次提出：熒光可作為一種分析工具，可惜他的建議沒能被很快地應(yīng)用于光學(xué)顯微成像技術(shù)。
喬治·斯托克斯(George Stokes)
過了40多年，德國的奧古斯特·科勒 (August K?hler) 與亨利·西登托普夫 (Henry Siedentopf) 于1911年研制出首個(gè)熒光顯微鏡 (Fluorescence Microscope) 測試裝置。
當(dāng)時(shí)的熒光顯微鏡以紫外光線為光源，用熒光色素對觀測目標(biāo) (細(xì)菌、植物、動(dòng)物組織等) 進(jìn)行染色處理，紫外光的照射會(huì)激發(fā)觀測目標(biāo)上的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，研究者根據(jù)自發(fā)熒光的成像開展研究。
熒光顯微鏡可用于觀察細(xì)菌、植物和動(dòng)物組織中的自發(fā)熒光現(xiàn)象。但因植物和動(dòng)物組織中的自發(fā)熒光很弱，加之當(dāng)時(shí)相關(guān)的技術(shù)還不夠成熟，熒光顯微鏡的應(yīng)用在20世紀(jì)初期發(fā)展較慢。
奧古斯特·科勒(August K?hler)、亨利·西登托普夫(Henry Siedentopf)
第一臺(tái)熒光顯微鏡測試裝置
20世紀(jì)30年代后，得益于各相關(guān)科學(xué)領(lǐng)域技術(shù)的進(jìn)步和創(chuàng)新，熒光顯微成像技術(shù)迎來了新的發(fā)展機(jī)遇。
1935年，奧地利的馬克斯·海廷格 (Max Haitinger) 等人改進(jìn)了生物組織標(biāo)本的染色技術(shù)，用熒光色素染色來標(biāo)記不能自發(fā)熒光的特定組織成分、細(xì)菌和其它病原體，標(biāo)本的熒光亮度增強(qiáng)了，在熒光顯微鏡下可觀察到生物組織的續(xù)發(fā)性熒光。20世紀(jì)50年代，隨著熒光抗體標(biāo)記方法及熒光顯微鏡裝置的改進(jìn)，熒光技術(shù)的應(yīng)用逐漸推廣。
日本的下村修 (Osamu Shimomura) 等人1962年從維多利亞水母中發(fā)現(xiàn)了一種奇特的蛋白質(zhì)，從藍(lán)光到紫外線都能使其受激發(fā)而發(fā)出綠色熒光。1974年，他們得到了這種蛋白的純化物，稱為綠色熒光蛋白 (Green Fluorescent Protein，簡稱GFP) 。綠色熒光蛋白的最突出特點(diǎn)是光毒性比傳統(tǒng)的熒光分子弱得多，非常適合用于對活細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。而基于綠色熒光蛋白的光學(xué)成像技術(shù)可使觀察者直接看到從微觀到宏觀各個(gè)層次的生命現(xiàn)象。
下村修(Osamu Shimomura)
在發(fā)現(xiàn)綠色熒光蛋白20多年后，美國的馬丁·查爾菲 (Martin Chalfie) 于1993年通過基因重組技術(shù)使除水母以外的生物 (大腸桿菌等) 也產(chǎn)生出綠色熒光蛋白。他將綠色熒光蛋白真正應(yīng)用于生物樣品的標(biāo)記，建立起用綠色熒光蛋白研究基因表達(dá)的基本方法。由于許多重大疾病都與基因表達(dá)異常相關(guān)，查爾菲的成果意義重大。
美籍華人錢永健 (Roger Y. Tsien) 大幅度改造優(yōu)化了綠色熒光蛋白，提升了它的發(fā)光效率，還進(jìn)一步發(fā)展出紅、藍(lán)、黃色的熒光蛋白，在生物學(xué)研究領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。這些熒光蛋白成為生物學(xué)家們得心應(yīng)手的工具，實(shí)時(shí)監(jiān)測各類病毒“作案”過程的愿望已可以實(shí)現(xiàn)了。
下村修、查爾菲與錢永健三位科學(xué)家因發(fā)現(xiàn)、提取和改進(jìn)綠色熒光蛋白的杰出貢獻(xiàn)獲得了2008年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。
馬丁·查爾菲(Martin Chalfie)
錢永健(Roger Y. Tsien)
熒光顯微鏡
熒光標(biāo)記的重組病毒感染模型系統(tǒng)
“強(qiáng)光源”也是迫切需要解決的關(guān)鍵技術(shù)！
阿爾伯特·愛因斯坦 (Albert Einstein) 1916年提出了“關(guān)于輻射的量子理論 (On the Quantum Theory of Radiation) ”，其中包括“受激輻射的光放大 (Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation，簡稱Laser) ”的概念 (中文譯為激光)，這是如何得到強(qiáng)光源的一個(gè)思路，他的論述為后來激光的實(shí)現(xiàn)奠定了理論基礎(chǔ)。
但在自然界普通光源中，產(chǎn)生受激輻射的成分很少，當(dāng)時(shí)的人們并沒認(rèn)識到該理論的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
阿爾伯特·愛因斯坦(Albert Einstein)(左)，他1916年發(fā)表的論文(右)
基于愛因斯坦的理論，幾十年之后的1953年，美國的查爾斯·唐尼斯 (Charles Townes) 研制成功一臺(tái)受激輻射微波放大裝置。后來該項(xiàng)技術(shù)由微波擴(kuò)展到紅外及可見光范圍。
1958年，唐尼斯與亞瑟·肖洛(Arthur Schawlow)在《物理評論(Physical Review)》雜志上發(fā)表論文，闡述了研制激光器的可能性以及所需的條件，指出這種激光具有亮度極高、單色性好、方向性好的特點(diǎn)。
就在同一時(shí)期，蘇聯(lián)的亞歷山大·普羅霍洛夫 (Aleksandr Prokhorov) 及尼古拉·巴索夫 (Nicolay Basov) 也提出了類似的設(shè)想。他們的設(shè)想非常吸引人，許多國家竟相開始研制激光器，各種實(shí)驗(yàn)方案都有，只是都未獲得成功。
這幾位都是了不起的人物，赫赫有名的科學(xué)大伽，愛因斯坦就不用說了。而唐尼斯、普羅霍洛夫及巴索夫三人分享了1964年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng)，肖洛則獲得了1981年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng)。
亞瑟·肖洛(Arthur Schawlow)、查爾斯·唐尼斯(Charles Townes)
亞歷山大·普羅霍洛夫(Aleksandr Prokhorov)、尼古拉·巴索夫(Nicolay Basov)
真正研制出第一臺(tái)激光器的是美國加利福尼亞州休斯航空公司實(shí)驗(yàn)室的西奧多·梅曼 (Theodore Maiman)。1960年5月16日，梅曼在自己研制的紅寶石激光器上成功獲得了波長為694.3納米的激光。7月7日，休斯公司正式宣布了這個(gè)消息。此后，不同工作物質(zhì)的激光器陸續(xù)研制出來，如氦氖氣體激光器、二氧化碳激光器等，激光在各領(lǐng)域的應(yīng)用研究也迅速展開。
激光的亮度可比普通光源高20個(gè)量級，而且是在包括紅外?可見光?紫外直至X射線波段內(nèi)的相干輻射光源，意義極為重大，因此被譽(yù)為是20世紀(jì)繼原子能、計(jì)算機(jī)、半導(dǎo)體之后的又一重大發(fā)明。梅曼獲得富蘭克林學(xué)會(huì)、美國物理學(xué)會(huì)、光學(xué)學(xué)會(huì)等多個(gè)獎(jiǎng)項(xiàng)，曾兩度被諾貝爾獎(jiǎng)提名，可惜未能獲得諾貝爾獎(jiǎng)。
西奧多·梅曼(Theodore Maiman)與他研制的紅寶石激光器
激光技術(shù)的突破使另一關(guān)鍵技術(shù)——“共聚焦成像”的構(gòu)想有了成功的可能。
共聚焦成像 (Confocal Imaging) ”的構(gòu)想是美國的馬文·明斯基 (Marvin Minsky)(被稱為“人工智能之父”) 在20世紀(jì)50年代提出的。
其原理是利用逐點(diǎn)掃描照明，并用空間針孔濾波手段去除樣品焦點(diǎn)平面外散射光進(jìn)行共聚焦成像。他為此設(shè)想申請了專利，也研制出一臺(tái)共聚焦掃描顯微鏡的樣機(jī)。
但當(dāng)時(shí)缺乏適用的超強(qiáng)光源，加之?dāng)?shù)據(jù)處理能力也還達(dá)不到所需的標(biāo)準(zhǔn)，這個(gè)構(gòu)想實(shí)際上只停留在理論階段。
馬文·明斯基(Marvin Minsky)
明斯基研制的共聚焦掃描顯微鏡樣機(jī)
梅曼的激光器研制獲得成功之后，美國的保羅·達(dá)維多維茨 (Paul Davidovits) 和大衛(wèi)·埃格爾 (David Egger) 于1969年以氦氖激光器為激發(fā)光源，制成了一臺(tái)激光掃描顯微鏡原型機(jī)。
1978年，德國的托馬斯·克里默 (Thomas Cremer) 和克里斯托夫·克里默(Christoph Cremer)兄弟首次提出了共聚焦激光掃描顯微鏡 (Confocal Laser Scanning Microscope，簡稱CLSM) 的設(shè)計(jì)方案：在熒光顯微鏡成像的基礎(chǔ)上加裝激光掃描裝置，用激光聚焦逐點(diǎn)掃描方式結(jié)合熒光標(biāo)記生物樣品的三維探測方法，通過計(jì)算機(jī)處理手段重構(gòu)生成三維圖像(與掃描電子顯微鏡類似)。
真正商業(yè)化的共聚焦激光掃描顯微鏡于1987年問世。
克里斯托夫·克里默(Christoph Cremer)、托馬斯·克里默(Thomas Cremer)
共聚焦激光掃描顯微鏡
從理論上說，該項(xiàng)技術(shù)的光學(xué)成像空間分辨能力并未真正突破“阿貝極限”，但其所得的物像分辨率比傳統(tǒng)的光學(xué)成像提高了30%~40%，大大優(yōu)化了成像質(zhì)量。
共聚焦激光掃描顯微鏡現(xiàn)已成為使用廣泛的高分辨率三維光學(xué)成像工具，通過移動(dòng)透鏡系統(tǒng)對半透明物體進(jìn)行三維掃描，在計(jì)算機(jī)系統(tǒng)的輔助下，對樣品從外觀到內(nèi)在、從靜態(tài)到動(dòng)態(tài)、從形態(tài)到功能進(jìn)行全方位的觀察。
對“阿貝極限”的真正挑戰(zhàn)要從20世紀(jì)90年代說起。
1994年，德國的斯蒂芬·黑爾 (Stefan Hell) 提出了受激發(fā)射損耗 (STimulated Emission Depletion，簡稱STED) 技術(shù)，用以突破“阿貝極限”實(shí)現(xiàn)超高分辨率成像。所謂“阿貝極限”，是光學(xué)元件的衍射效應(yīng)造成的。
光學(xué)顯微鏡的照明光經(jīng)光學(xué)系統(tǒng)聚焦后在樣品上形成的光斑實(shí)際上是個(gè)光的衍射斑，在此斑范圍內(nèi)的樣品會(huì)發(fā)出照明光引發(fā)的熒光，使這部分樣品的細(xì)節(jié)信息無法被分辨。要實(shí)現(xiàn)超越“阿貝極限”，關(guān)鍵是設(shè)法減少單個(gè)掃描點(diǎn)處的有效熒光發(fā)光面積。
黑爾提出的方法十分巧妙，他設(shè)想同時(shí)使用兩束激光來照射樣品，一束為激發(fā)光，另外一束為空心形的受激發(fā)射損耗光，樣品上發(fā)生受激發(fā)射損耗效應(yīng)的部分不能發(fā)出熒光，僅樣品的中心區(qū)域可發(fā)出輻射熒光，這樣就可達(dá)到大大降低熒光激發(fā)半徑的目的。
可以想象，實(shí)現(xiàn)這項(xiàng)技術(shù)的難度相當(dāng)大，黑爾于2000年終于用兩臺(tái)鈦寶石飛秒脈沖激光器實(shí)現(xiàn)了超高分辨率受激發(fā)射損耗顯微成像。
斯蒂芬·黑爾(Stefan Hell)
除了受激發(fā)射損耗顯微技術(shù)，還有幾項(xiàng)重要的技術(shù)獲得了突破。
美國的埃里克·白茲格 (Eric Betzig) 與威廉·莫爾納 (William Moerner) 分別獨(dú)立發(fā)現(xiàn)了單分子開關(guān)的方法，利用圖像多次疊加的技術(shù)得到單分子的精確定位，再將這些分子的熒光圖像合成，可獲得比傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡至少高10倍以上的分辨率。
白茲格將該項(xiàng)技術(shù)稱為光激活定位顯微術(shù) (Photo Activated Localization Microscopy，簡稱PALM)。
埃里克·白茲格(Eric Betzig)
威廉·莫爾納(William Moerner)
美國哈佛大學(xué)的華裔女科學(xué)家莊小威 (Xiaowei Zhuang) 等人發(fā)明了利用有機(jī)染料 (不用熒光蛋白) 對熒光分子的可調(diào)控性對單分子進(jìn)行精確定位，再用圖片重組方式獲得超高分辨率顯微鏡圖像的技術(shù)——隨機(jī)光學(xué)重建顯微術(shù) (STochastic Optical Reconstruction Microscopy，簡稱STORM) 。
莊小威積極推動(dòng)了這項(xiàng)技術(shù)的發(fā)展，既實(shí)現(xiàn)了三維同時(shí)超分辨率顯現(xiàn)，又進(jìn)一步提高了該技術(shù)的成像速率 (莊小威的成果與埃里克·白茲格的成果在2006年同時(shí)發(fā)表，只是莊小威投稿的日期晚了4個(gè)月)。
莊小威(Xiaowei Zhuang)
正是由于上述多項(xiàng)技術(shù)的創(chuàng)新，光學(xué)顯微鏡最終實(shí)現(xiàn)了“阿貝極限”的真正突破 (分辨率達(dá)20納米)，使能進(jìn)行活體物質(zhì)觀察的光學(xué)顯微鏡又重新煥發(fā)出青春，這對多個(gè)前沿研究領(lǐng)域產(chǎn)生了重大影響，尤其是為常溫下活體生物學(xué)研究帶來了重大機(jī)遇。
生物學(xué)家能夠?qū)崟r(shí)觀察到生物分子如何在大腦神經(jīng)細(xì)胞之間生成神經(jīng)突觸，看到病毒顆粒侵入細(xì)胞的全過程，甚至還可追蹤帕金森、阿爾茲海默癥、亨廷頓癥患者體內(nèi)相關(guān)蛋白的累積過程 (莫爾納、黑爾、白茲格三人被授予2014年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)(很遺憾莊小威未能獲獎(jiǎng)))。
突破“阿貝極限”的光學(xué)顯微鏡
受激發(fā)射損耗顯微鏡(STED)(左)與一般光學(xué)顯微鏡圖像(右)的對比
共聚焦顯微鏡(CLSM)(左)與受激發(fā)射損耗顯微鏡(STED)圖像(右)的對比
難能可貴的是，黑爾在獲諾貝爾獎(jiǎng)之后給自己制定了進(jìn)一步提高分辨率的奮斗目標(biāo)——被他稱為“后諾獎(jiǎng)超分辨率”。
2017年初，他的團(tuán)隊(duì)在Science發(fā)表了題為“Science-2017-Nanometer resolution imaging and tracking of fluorescent molecules with minimal photon fluxes”的論文，介紹了結(jié)合了STED、PLAM和STORM技術(shù)優(yōu)勢的MINFLUX超分辨率熒光顯微鏡 (也稱為納米顯微鏡) 。研究團(tuán)隊(duì)的實(shí)驗(yàn)實(shí)現(xiàn)了6納米的分辨率，他們的目標(biāo)是實(shí)現(xiàn)1納米的分辨率，使生物學(xué)家不僅可看清病毒的結(jié)構(gòu)，還可清晰地觀察病毒感染細(xì)胞的整個(gè)過程，最終找到滅殺病毒的有效方法。
斯蒂芬·黑爾(Stefan Hell)和他的MINFLUX研究團(tuán)隊(duì)
共聚焦顯微鏡圖像(上左)、受激發(fā)射損耗顯微鏡(STED)圖像(上右)、超分辨率熒光顯微鏡(MINFLUX)圖像(下)的對比
據(jù)最新報(bào)道，黑爾的MINFLUX團(tuán)隊(duì)又取得了新進(jìn)展，實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞中3D多色、優(yōu)于1納米分辨率的成像，題為“MINFLUX nanoscopy delivers 3D multicolor nanometer resolution in cells”的論文2020年1月13日發(fā)表在Nature Methods。
黑爾MINFLUX研究團(tuán)隊(duì)取得的最新進(jìn)展
雙色3D MINFLUX納米顯微鏡圖像顯示的細(xì)胞分布及蛋白質(zhì)距離(上圖)，傳統(tǒng)顯微鏡圖像(下圖左)
生命體與成像設(shè)備分辨率的對應(yīng)關(guān)系示意圖
“阿貝極限”是恩斯特·阿貝 (Ernst Abbe) 1873年提出的。根據(jù)阿貝的理論，光的基本衍射性質(zhì)決定了以可見光 (波長范圍在0.38~0.78微米) 作為光源的光學(xué)顯微鏡無法實(shí)現(xiàn)0.2微米 (約可見光波長的二分之一) 以下的分辨率。
在一代又一代科學(xué)家堅(jiān)持不懈的努力之下，百余年之后的21世紀(jì)初，光學(xué)顯微鏡終于實(shí)現(xiàn)了“阿貝極限”的真正突破！超高分辨率的光學(xué)顯微鏡使科學(xué)家們能深入了解病毒在活細(xì)胞內(nèi)感染、復(fù)制及釋放的整個(gè)動(dòng)態(tài)過程，為人類攻克致病病毒提供了有力的工具。
“阿貝極限”的真正突破經(jīng)歷了百余年，衷心地向?yàn)榇俗龀鼋艹鲐暙I(xiàn)的科學(xué)家們表示深深的敬意！
注：本文經(jīng)授權(quán)轉(zhuǎn)載自微信公眾號“中科院高能所”。
制版編輯 | Morgan
